ЛРРК2-ИН-1 ЦАС 1234480-84-2 Биолошка активност

Ин витро

Дивљи тип и Г2019С трансдукција резултирају у 2,5 пута већем ТР-ФРЕТ сигналу који може бити инхибиранЛРРК2-ИН-1на начин зависан од дозе са ИЦ50 вредностима 0,08 уМ и 0,03 уМ, респективно [1]. ЛРРК2-ИН-1 је имао ИЦ50 од 45 нМ за инхибицију ДЦЛК2 и показује ИЦ50 већи од 1 уМ када је процењен у биохемијским тестовима за АУРКБ, ЦХЕК2, МКНК2, МИЛК, НУАК1 и ПЛК1. Потврђено је да ЛРРК2-ИН-1 инхибира МАПК7 са ЕЦ50 од 160 нМ. ЛРРК2-ИН-1 индукује инхибицију инхибиције фосфорилације Сер910 и Сер935 праћеног губитком 14-3-3 везивања за дивљи тип ЛРРК2 и ЛРРК2 [Г2019С] који је стабилно трансфектован у ћелије ХЕК293 [2]. ЛРРК2-ИН-1 је умерено цитотоксичан са ИЦ50 од 49,3 уМ у ћелијама ХепГ2. ЛРРК2-ИН-1 показује генотоксичност у присуству и одсуству С9 при 15.6 и 3.9 уМ, респективно [3]. ЛРРК2-ИН-1 инхибира пролиферацију, миграцију и индукује смрт ћелија са обележјима апоптозе ХЦТ116 и АсПЦ-1 ћелија [4] ..

Ин Виво

ЛРРК2-ИН-1 (100 мг / кг, ип) индукује депосфорилацију ЛРРК2 у бубрегу мишева [2]. Перитуморна ињекција ЛРРК2-ИН-1 (100 мг / кг) резултира значајним смањењем волумена и тежине тумора ксенографта АсПЦ-1 [4].

Кинасе Тест

Активни ГСТ-ЛРРК2 (1326-2527), ГСТ-ЛРРК2 [Г2019С] (1326-2527), ГСТ-ЛРРК2 [А2016Т] (1326-2527) и ГСТ-ЛРРК2 [А2016Т + Г2019С] (1326-2527) ) ензим је пречишћен глутатион-сефарозом из ћелијског лизата ХЕК293 36 х након пролазне трансфекције одговарајућих конструкција цДНА. Тестови пептидне киназе, изведени у дупликату, постављени су у укупној запремини од 40 уЛ која садржи 0,5 уЛ ЛРРК2 киназе (која са приближно 10% чистоћом даје коначну концентрацију од 8 нМ) у 50 мМ Трис / ХЦл, пХ 7,5, 0,1 мМ ЕГТА, 10 мМ МгЦл2, 20 уМ Ництиде, 0.1 уМ [и-32П] АТП (500 цпм / пмол) и назначене концентрације инхибитора раствореног у ДМСО. После инкубације током 15 минута на 30 ° Ц, реакције се завршавају примећивањем 35 уЛ реакционе смеше на папиру фосфоцелулозе П81 и урањањем у 50 мМ фосфорне киселине. Узорци су опрани опсежно и уградња [γ-32П] АТП у Ництиде квантификовано је Церенковим бројењем. ИЦ50 вредности израчунавају се помоћу ГрапхПад Присм коришћењем нелинеарне регресијске анализе.

Целл Тест

Ћелије (104 ћелије по лежишту) сеју у плочу са културом од 96 јажица у три примерка. Ћелије се узгајају у присуству ЛРРК2-ИН-1 са ДМСО као вехиклом на 0, 0,31, 0,63, 1, 2, 5, 10 и 20 µМ. 48 х након третмана, у сваку јажицу се дода 10 μЛ ТАЦС МТТ реагенса и ћелије се инкубирају на 37 ° Ц све док тамни кристални талог не постане видљив у ћелијама. 100 μЛ 266 мМ НХ4ОХ у ДМСО се затим дода у јажице и постави на плочицу са малим брзинама током 1 минута. Након мућкања, плоча се пусти да се инкубира 10 минута заштићена од светлости и ОД550 за сваки отвор се очитава помоћу читача микроплоча. Резултати су просечени и израчунати као проценат ДМСО (возила) контроле + / - стандардна грешка средње вредности.

Анимал Админ

ЛРРК2-ИН-1је растворен у Цаптисолу и примењиван интраперитонеалном ињекцијом у мушке Ц57БЛ / 6 дивљег типа у дози од 100 мг / кг. Контролни мишеви убризгавају једнаку запремину Цаптисол-а. У временским тачкама од 1 и 2 сата, мишеви се истискују дислокацијом грлића материце, а бубрежно и мождано ткиво брзо сецирају и брзо смрзавају у течном азоту.

Референце

[1] Хермансон СБ, ет ал. Сцреенинг за нове инхибиторе ЛРРК2 коришћењем високопропусног ТР-ФРЕТ ћелијског теста за ЛРРК2 Сер935 Пхоспхорилатион.ПЛоС Оне. 2012; 7 (8): е43580. Епуб 2012, 28 авг.

[2]. Денг, Ксианминг. И др. Карактеризација селективног инхибитора киназе болести Паркинсон ГГ-а, ЛРРК2. Натуре Цхемицал Биологи (2011), 7 (4), 203-205.

[3]. Косхибу К, ет ал. Алтернатива ЛРРК2-ИН-1 за фармаколошка испитивања болести Паркинсон ГГ # 39; Фармакологија. 2015; 96 (5-6): 240-7.

[4]. Веигант Н, ет ал. Инхибитор киназе малих молекула ЛРРК2-ИН-1 показује моћну активност против карцинома дебелог црева и панкреаса кроз инхибицију киназе сличне квоцзи 1. канцера. 2014. 6. маја; 13: 103